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葡聚糖凝膠柱

更新時間：2011-03-09 | 點擊率：1608

（1）預處理
稱取葡聚糖凝膠（有不同型號）若幹克，加入洗脫劑（通常為甲醇或者水，這裏以甲醇為例）約20倍凝膠量，置室溫下3h進行溶脹，溶脹必須*，否則會使上柱後流速變慢，凝膠斷裂等。
（2）裝柱
凝膠層析柱的直徑與柱長之比一般為1:15。柱的底部用裝有細玻璃管的橡皮塞塞緊，用洗淨的玻璃絲（約200目尼龍布）墊底或購買類似規格的商品柱。然後將柱垂直安裝好，接著將溶脹好的凝膠邊攪勻邊緩緩連續裝入，色譜柱的出口流速m維持在5~10ml/min。凝膠顆粒沉積到柱底後關緊色譜柱，等沉降到1-2cm時再2打開色譜柱。直至降到滿意高度為止，等凝膠柱內的液體留的與凝膠高度差不多時，用較小的濾紙蓋住凝膠床表麵，再用洗脫劑洗脫過夜。裝柱後的凝膠必須均勻，不能有氣泡或明顯條紋。否則，必須到出重裝。
（3）加樣
裝好的色譜柱至少要用相當於3倍保留體積的洗脫劑平衡，待洗脫劑流至與凝膠柱液麵相平時（不能流幹，否則會帶入氣泡），用滴管吸取樣品溶液，在高於凝膠表麵約1cm處，沿管壁四周緩緩滴加樣品液，加完後打開下麵的出口，使樣品滲入凝膠內。再關閉出口，用少量洗脫液將管壁殘留的樣品洗下，再打開出口，至溶液滲入柱內，再關閉出口。可以考慮再加一層薄薄的脫脂棉以保護柱表麵（我一般不加），然後即可進行洗脫。
（4）洗脫與收集
洗脫時，用甲醇作洗脫劑，並且要連續不斷地進行，使凝膠柱上端保持一定的液層，防止凝膠柱表麵的液體流幹。一般酸性洗脫劑中堿性物質容易洗脫，堿性洗脫劑中酸性物質容易洗脫。多糖類物質等極性大的物質考慮用水洗脫，常用的洗脫劑是水-甲醇，水-乙醇，水-丙酮等，一般根據自己樣品的性質選擇洗脫液，洗脫液可一直用單一梯度。凝膠色譜的共性是流速慢，每份一般體積較小。（內徑1.3cm左右，長80cm左右的柱子我一般每份收集液為8ml）
（5）凝膠的再生和回收
凝膠柱多次使用後，若汙染嚴重，則考慮用50度左右的2%的NaOH和0.5mol/LNaCl混合液浸泡後，再用水洗淨即可。
通常層析柱經洗脫劑再生、平衡後，就可反複使用。但使用過多次後凝膠床體積變小，流速降低，凝膠汙染雜質過多，甚至變色，需經再生後才可使用。再生方法有多種：如（1）用水進行逆向衝洗，再用洗脫劑平衡，便可重新使用。又如（2）把凝膠倒出，用6mol/L脲浸泡凝膠半小時，抽濾，再用水漂洗數次，除淨脲，必要時重複上述操作即可重新使用。

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